Selleks, et erinevad liigid erineksid tavalistest esivanematest ja ajaksid edasi evolutsioon, peab toimuma paljunemisvõime. Spetsifikatsiooni põhjustavat reproduktiivset isolatsiooni on mitut tüüpi. Üks levinumaid meetodeid on prezügootiline eraldamine, mis toimub enne viljastamist nende vahel sugurakud ja hoiab ära erinevate liikide leviku seksuaalselt paljunev. Põhimõtteliselt, kui isikud ei saa paljuneda, peetakse neid teisteks liigid ja lahknevad elupuul.
Prezügootilist isoleerimist on mitut tüüpi, alates sugurakkude kokkusobimatusest käitumisviisideni selle tulemuseks on kokkusobimatus ja isegi selline isolatsioonitüüp, mis füüsiliselt pärsib üksikisikuid aretus.
Mehaaniline eraldamine - suguorganite kokkusobimatus - on ilmselt lihtsaim viis, kuidas peatada üksikisikute paljunemine üksteisega. Olgu see suguelundite kuju, asukoht või suuruse erinevused keelata inimestel paaristumist, kui suguorganid ei sobi omavahel kokku, paaritumine pole tõenäoline ilmnema.
Taimedes töötab mehaaniline isoleerimine natuke teistmoodi. Kuna suurus ja kuju ei ole taimede paljunemisel olulised, tuleneb mehaaniline eraldamine tavaliselt taimede erineva tolmeldaja kasutamisest. Näiteks taim, mille jaoks on loodud struktuur
mesilaste tolmeldamine ei ühildu lilledega, millele toetuda kolibiribad nende õietolmu levitamiseks. Kuigi see on ikkagi erineva kuju tagajärg, pole oluline mitte tegelike sugurakkude kuju, vaid lillekuju ja tolmeldaja kokkusobimatus.Erinevatel liikidel on tavaliselt erinevad pesitsusajad. Naiste fertiilsustsüklite ajastamine võib viia ajalise eraldatuseni. Sarnased liigid võivad olla füüsiliselt ühilduvad, kuid ei pruugi siiski paljuneda, kuna nende paaritushooajad toimuvad erinevatel aastaaegadel. Kui ühe liigi emasloomad on konkreetsel kuul viljakad, kuid isased ei suuda sel ajal aastas paljuneda, võib see kahe liigi vahel paljuneda.
Mõnikord kattuvad väga sarnaste liikide paaritumisperioodid mõnevõrra. See kehtib eriti juhul, kui liigid elavad erinevates piirkondades, jätmata hübridiseerumise võimalust. Siiski on näidatud, et sarnastel liikidel, kes elavad samas piirkonnas, pole tavaliselt paaritumise faase, isegi kui nad asuvad erinevas keskkonnas. Tõenäoliselt on see kohanemisviis, mille eesmärk on vähendada konkurentsi ressursside ja kaaslaste pärast.
Teine liikidevaheline prezügootiline isoleerimine on seotud indiviidide käitumisega ja eriti käitumisega paaritumisajal. Isegi kui kaks eri liikide populatsiooni on nii mehaaniliselt kui ka ajaliselt ühilduvad, on nende tegelik paaritusrituaalkäitumine võiks olla piisav, et hoida liigid reproduktiivsest üksteisest eemal teine.
Paaritusrituaalid koos muu vajaliku paarituskäitumisega - näiteks paaritumiskutsed ja tantsud - on sama liigi meestel ja naistel väga vajalikud, et näidata, et on aeg paljuneda. Kui paaritusrituaal lükatakse tagasi või seda ei tunnustata, siis paaritumist ei toimu ja liigid isoleeritakse reproduktiivselt üksteisest.
Näiteks sinise jalaga poiss linnul on väga peene paaritustants, mida isased peavad emasloomade peksmiseks ette võtma. Emane võtab kas isendi edusammud vastu või lükkab need ümber, kuid teiste linnuliikide puhul, kellel pole sama Paaritants ignoreerib naine täielikult - see tähendab, et neil pole võimalust paljundada emase sinise jalaga poiss.
Isegi väga lähedastel liikidel on eelistused selle järgi, kus nad elavad ja kus paljunevad. Mõnikord on need paljunemisjuhtumite eelistatavad asukohad liikide vahel kokkusobimatud, mis viib nn elupaiga eraldatuseni. Ilmselt ei ole siis paljunemisvõimalust, kui kahe erineva liigi isendid elavad üksteise lähedal. Seda tüüpi reproduktiivne isoleerimine viib veelgi suurema eristuseni.
Isegi erinevad samas piirkonnas elavad liigid ei pruugi nende eelistatava paljunemiskoha tõttu ühilduda. Mõned linnud eelistavad munade munemiseks ja pesade tegemiseks teatud tüüpi puid või isegi sama puu erinevaid osi. Kui piirkonnas asuvad sarnased linnuliigid, valivad nad erinevad asukohad ja ei puutu omavahel kokku. See hoiab liigid eraldi ja ei suuda üksteisega paljuneda.
Gameetiline eraldamine tagab, et ainult sama liigi seemnerakud pääsevad selle liigi munadesse ja mitte ükski teine. Seksuaalse paljunemise ajal liidetakse emasloom mehe spermaga ja koos loovad nad zigoodi. Kui sperma ja munarakk ei sobi kokku, ei saa viljastumine aset leida. Muna eraldatud mõnede keemiliste signaalide tõttu ei pruugi sperma seda isegi meelitada. Teine sulandumist takistav tegur on sperma, mis ei suuda oma keemilise koostise tõttu muna tungida. Kumbki neist põhjustest on piisav termotuumasünteesi nurjumiseks ja zygote moodustumise vältimiseks.
Seda tüüpi reproduktiivne isoleerimine on eriti oluline nende liikide jaoks, kes paljunevad vees väliselt. Näiteks lasevad enamiku kalaliikide emasloomad oma munad lihtsalt oma eelistatud kasvukoha vette. Seejärel tulevad selle liigi isased kalad kaasa ja vabastavad munarakkudest sperma, et neid viljastada. Kuna see toimub vedelas keskkonnas, pühib osa seemnerakke veemolekulid minema ja hajub. Kui poleks gameetilisi eraldusmehhanisme, võiksid kõik seemnerakud sulanduda ükskõik millise munaga, mille tulemuseks oleks mis tahes liigi hübriidid, mis tol ajal sealses vees paarisid.