Kuidas teha fosfaatpuhverdatud soolalahust (PBS)

Fosfaatpuhverdatud soolalahus (PBS) on puhverlahus seda kasutatakse tavaliselt immunohistokeemiliseks värvimiseks ja seda kasutatakse sageli bioloogilistes uuringutes. PBS on veepõhine soolalahus, mis sisaldab naatriumvesinikfosfaati, naatriumkloriidi ja mõnel juhul ka kaaliumkloriidi ja kaaliumdivesinikfosfaati.

Immunohistokeemia tähendab antigeenide nagu valkude tuvastamise protsessi a-rakkudes koesektsioon, kasutades antikehade spetsiifilisi seondumisi bioloogiliste antigeenidega koed. Immunofluorestsentsvärvimine oli esimene immunohistokeemiline värvimismeetod.

Antigeenid muutuvad nähtavaks, kui need on konjugeeritud antikehadega, kasutades fluorestsentsvärve, põhjustades antigeeni ja antikeha siduv reaktsioon. See protsess toimub siis, kui see aktiveeritakse fluorestsentsmikroskoobi all kindla lainepikkusega põneva valguse abil.

Lahuste osmolaarsus ja ioonide kontsentratsioonid vastavad inimese keha omadele - nad on isotoonilised.

PBS-i saate valmistada mitmel viisil. Valemid on mitu. Mõned neist ei sisalda kaaliumi, teised aga kaltsiumi või

See retsept on suhteliselt lihtne. See on mõeldud 10x PBS põhilahuse (0,1 M) jaoks. Kuid võite teha ka 1X põhilahuse või alustada selle 10X retseptiga ja lahjendada 1X-ni. Kogu protsess võtab umbes 10 minutit ja on ka võimalus Tweeni lisamiseks.

• Ühealuseline naatriumfosfaat (veevaba)
• Kahealuseline naatriumfosfaat (veevaba)
• Naatriumkloriid
• Paatide mõõtkava ja kaalumine
• Magnetsegaja ja segamisriba
• Kalibreeritud pH-sond ja sobivad lahused pH reguleerimiseks
• 1 L mõõtekolb
• Tween 20 (valikuline)

1. Kaalutakse 10,9 g kahealuselist veevaba naatriumfosfaati (Na2HPO4), 3,2 g veevaba naatriumfosfaadi ühealuselist (NaH2PO4) ja 90 g naatriumkloriidi (NaCl). Lahustage veidi alla 1 liitris destilleeritud vees.
2. Reguleerige pH väärtusele 7,4 ja viige lahus lõpliku mahuni 1 L.
3. Enne kasutamist lahjendada 10 korda ja vajadusel reguleerida pH-d uuesti.
4. Võite teha PBS-lahuse, mis sisaldab 0,5 protsenti Tween 20, lisades 1 I lahusele 5 ml Tween 20.

Pärast PBS-lahuse valmistamist hoidke puhvrit toatemperatuuril.

Mitteveevabad reaktiivid võivad olla asendatud, kuid peate veemolekulide mahutamiseks ümber arvutama iga vastava massi.

Fosfaatpuhverdatud soolalahusel on palju kasutusvõimalusi, kuna see on enamiku rakkude jaoks isotooniline ja mittetoksiline. Seda saab kasutada ainete lahjendamiseks ja seda kasutatakse sageli rakkude mahutite loputamiseks. PBS-i saab erinevates meetodites kasutada lahjendusmaterjalina biomolekulide kuivatamiseks, kuna selles olevad veemolekulid on struktureeritud aine - näiteks valgu - ümber. See kuivatatakse ja immobiliseeritakse tahkele pinnale.

Rakkude hävimise vältimiseks on pH püsiv ja ühtlane.

Ainega seonduv õhuke veekiht hoiab ära denaturatsiooni või muude kehaehituse muutuste. Karbonaatpuhvreid saab kasutada samal eesmärgil, kuid väiksema tõhususega.

PBS-i saab kasutada ka etalonspektri mõõtmiseks valk adsorptsioon ellipsomeetrias.