TAE puhver on lahus, mis koosneb Tris-alusest, äädikhappest ja EDTA-st (Tris-atsetaat-EDTA). See on ajalooliselt kõige tavalisem puhver, mida kasutatakse agaroosgeeli jaoks elektroforees tuletatud DNA toodete analüüsimisel PCR võimendamine, DNA puhastusprotokollid või DNA kloonimine katsed.
Sellel puhvril on madal ioontugevus ja väike puhverdusvõime. See sobib kõige paremini suurte (> 20 kilobase) DNA tükkide elektroforeesiks ja seda tuleb sagedamini asendada või pikema (> 4 tunni) geeltsüklite ajaks tsirkuleerida. Seda silmas pidades võiksite kaaluda mitme puhverpartii valmistamist.
Arvestades, et puhvrit on lihtne teha ja toiminguid saab kiiresti läbi viia, ei tohiks mitme partii korraga valmistamine olla eriti aeganõudev ega keeruline. Allpool toodud juhiseid kasutades peaks TAE puhvri valmistamine võtma vaid 30 minutit.
Mida vajate TAE puhvri jaoks
Kuna TAE puhvri tegemine nõuab ainult kiireid ja lihtsaid juhiseid, pole selle jaoks vajalike materjalide arv liiga suur. Teil on vaja ainult EDTA (etüleendiamiintetraäädikhape) dinaatriumisoola, Tris-alust ja jää-äädikhapet.
Puhvri valmistamiseks on vaja ka pH-meetrit ja vastavalt vajadusele kalibreerimisstandardeid. Teil on vaja ka 600 milliliitri ja 1500 milliliitri keeduklaase või kolbe, samuti gradueeritud silindreid. Lõpuks vajate deioniseeritud vett, segusid ja segamisplaate.
Järgmistes juhendites on valemi mass (iga elemendi aatommass korrutatakse aatomite arvuga, seejärel liidetakse iga elemendi mass) kui FW.
Valmistage ette EDTA põhilahus
EDTA lahendus valmistatakse ette enne tähtaega. EDTA ei lähe täielikult lahusesse enne, kui pH on reguleeritud umbes 8,0-ni. 500-milliliitrise varu jaoks 0,5 M (molaarsus või kontsentratsioon) EDTA lahus kaalutakse 93,05 grammi EDTA dinaatriumisoola (FW = 372,2). Lahustage see 400 milliliitris deioniseeritud vees ja reguleerige pH naatriumhüdroksiidiga (NaOH). Lisage lahus lõppmahuni 500 milliliitrit.
Looge oma aktsialahendus
Valmistage kontsentreeritud (50x) TAE põhilahus, kaaludes 242 grammi Tris-alust (FW = 121,14) ja lahustades selle umbes 750 milliliitris deioniseeritud vees. Lisage ettevaatlikult 57,1 milliliitrit jäähapet ja 100 milliliitrit 0,5 M EDTA (pH 8,0).
Pärast seda reguleeritakse lahus lõppmahuni 1 liiter. Seda põhilahust saab hoida toatemperatuuril. Selle puhvri pH-d ei reguleerita ja see peaks olema umbes 8,5.
Valmistage ette TAE puhvri töölahus
1x TAE puhvri töölahus valmistati põhilahuse lahjendamisega deioniseeritud vees lihtsalt 50x. Lõplikud lahustunud kontsentratsioonid on 40 mM (millimolaarsed) Tris-atsetaadid ja 1 mM EDTA. Puhver on nüüd valmis kasutamiseks agaroosgeeli käitamiseks.
Mähkimine üles
Enne kui alustate TAE puhvri kõigi ülaltoodud materjalide olemasolu, kontrollige inventari üle. Teie varustuspersonal peaks suutma teile öelda, kas neil on laos kõiki vajalikke esemeid. Sa ei taha, et protseduuri keskel jääb millestki puudu.