Naatriumtsitraatpuhvrit kasutatakse RNA eraldamiseks sageli, kuna see minimeerib RNA ahelate aluse hüdrolüüsi, muutes selle mRNA puhastamisel hindamatuks genoomne uurimistööks ja transkriptsiooni uurimiseks. Tsitraadipõhised puhvrid aitavad ka antigeenide tuvastamist fikseeritud koepreparaatides, kuna need lõhustavad antigeenide ja fikseerimissöötme vahel moodustatud ristsidemeid.
Järgmiste lihtsate toimingute abil saate 10 minuti jooksul luua naatriumtsitraatpuhvri, mille pH on 6 (happeline).
Naatriumtsitraatpuhvri materjalid
Naatriumtsitraatpuhvri valmistamiseks on vaja vähe materjale. Sidrunhappega on vaja ainult 1 M naatriumhüdroksiidi, destilleeritud vett ja kalibreeritud pH-sondi. Naatriumtsitraat on valikuline.
Puhvri valmistamiseks on vaja ka 1-liitrist mõõtesilindrit, 1-liitrist mõõtekolbi ja kolme 1-liitrist meediumipudelit. Lõpuks vajate magnetilist segamisriba ja magnetsegurit. Kõiki neid materjale võib leida koolist, töökoha laborid või ostetakse veebist või erikauplustest.
Puhvri valmistamise kaks võimalust
Naatriumtsitraatpuhvrite valmistamiseks on kaks meetodit, sõltuvalt teile kättesaadavatest materjalidest.
- Kui teil on nii sidrunhapet kui ka konjugeeritud alust, looge kummagi lähtelahus, segades 21 grammi sidrunhapet 1 liitris destilleeritud vees ja 29,4 grammi naatriumtsitraati 1 liitris destilleeritud vees vesi.
- Kui teil on käepärast ainult sidrunhapet, segage 2,1 grammi veidi alla 1 liitri destilleeritud veega.
Sidrunhappe ja naatriumtsitraadi lahuste segamine
Segage 82 milliliitrit sidrunhappe lahust 18 milliliitri naatriumtsitraadi lahusega. Lisage sellele piisavalt destilleeritud vett, et segu maht jääks pisut alla ühe liitri.
PH reguleerimine
Lahust segades ettevaatlikult magnetseguriga, kasutage 1M naatriumhüdroksiidi segu pH reguleerimiseks väärtusele 6,0. Seejärel lisage mõõtekolbiga rohkem destilleeritud vett, et lahuse lõplik kogumaht oleks täpselt 1 liiter.