10x TBE elektroforeesi puhverprotokoll või retsept

TBE ja TAE kasutatakse puhvritena molekulaarbioloogias, peamiselt elektroforees nukleiinhapete sisaldus. Tris-puhvreid kasutatakse kergelt aluselistes pH tingimustes nagu DNA elektroforeesi puhul, kuna see hoiab DNA-d lahuses lahustuv ja deprotoneeritud, nii et see köidab positiivse elektroodi ja migreerub läbi a geel. EDTA on lahuse koostisosa, kuna see tavaline kelaativ aine kaitseb nukleiinhappeid ensüümide toimel lagunemise eest. EDTA kelateerib kahevalentsed katioonid, mis on kofaktorid nukleaasidele, mis võivad proovi saastada. Kuna aga magneesiumi katioon on DNA polümeraasi ja restriktsiooniensüümide kofaktor, hoitakse EDTA kontsentratsioon taotluslikult madalal (kontsentratsioon umbes 1 mM).

Te ei pea lahust steriliseerima. Kuigi sademeid võib tekkida teatud aja möödudes, on põhilahus siiski kasutatav. PH-d saab reguleerida pH-meetri abil ja kontsentreeritud segu tilkhaaval lisamisega soolhape (HCl). TBE puhvri säilitamine toatemperatuuril on hea, ehkki võite sadestada soodustavate osakeste eemaldamiseks põhilahuse läbi 0,22-mikronilise filtri.

instagram viewer

5X või 10X põhilahuse juhuslik kasutamine annab kehvad tulemused, kuna toodetakse sama palju soojust. Lisaks sellele, et proov on halb, võite seda ka kahjustada.

Kuigi TBE ja TAE on tavalised elektroforeesipuhvrid, on neid siiski muud võimalused madala molaarsusega juhtivate lahuste jaoks, sealhulgas liitiumboraatpuhver ja naatriumboraatpuhver. TBE ja TAE probleemiks on see, et Tris-põhised puhvrid piiravad elektroforeesis kasutatavat elektrivälja, kuna liiga suur laadimine põhjustab temperatuuri tõusu.

instagram story viewer