PBS või fosfaatpuhverdatud soolalahus on puhverlahus see on eriti väärtuslik, kuna jäljendab inimkeha vedelike ioonide kontsentratsiooni, osmolaarsust ja pH-d. Teisisõnu, see on inimese jaoks isotooniline, seega põhjustab bioloogiliste, meditsiiniliste või biokeemiliste uuringute korral vähem tõenäosus rakkude kahjustusi, toksilisust või soovimatut sadenemist.
PBS keemiline koostis
PBS-i lahuse valmistamiseks on mitu retsepti. Oluline lahus sisaldab vett, naatriumvesinikfosfaati ja naatriumkloriid. Mõned preparaadid sisaldavad kaaliumkloriidi ja kaaliumdivesinikfosfaati. Killustumise vältimiseks võib EDTA-d lisada ka rakulises ettevalmistamises.
Fosfaatpuhverdatud soolalahus pole ideaalne kasutamiseks lahendustes mis sisaldavad kahevalentsed katioonid (Fe2+, Zn2+), kuna võib esineda sademeid. Kuid mõned PBS-i lahused sisaldavad kaltsiumi või magneesiumi. Samuti pidage meeles, et fosfaat võib pärssida ensümaatilisi reaktsioone. DNA-ga töötades olge sellest potentsiaalsest puudusest eriti teadlik. Ehkki PBS on füsioloogiliste teaduste jaoks suurepärane, pidage meeles, et fosfaat PBS-puhverdatud proovis võib sadestuda, kui proov segatakse etanooliga.
1X PBS-i tüüpilise keemilise koostise lõppkontsentratsioon on 10 mM PO43−, 137 mM NaCl ja 2,7 mM KCI. Siin on reaktiivide lõplik kontsentratsioon lahuses:
| Sool | Kontsentratsioon (mmol / L) | Kontsentratsioon (g / L) |
|---|---|---|
| NaCl | 137 | 8.0 |
| KCl | 2.7 | 0.2 |
| Ei2HPO4 | 10 | 1.42 |
| KH2PO4 | 1.8 | 0.24 |
Fosfaatpuhverdatud soolalahuse valmistamise protokoll
Sõltuvalt eesmärgist võite valmistada 1X, 5X või 10X PBS-i. Paljud inimesed ostavad lihtsalt PBS-puhvertablette, lahustavad need destilleeritud vees ja reguleerivad pH-d vastavalt vajadusele vesinikkloriidhappega või naatriumhüdroksiid. Kuid lahendust on nullist lihtne valmistada. Siin on 1X ja 10X fosfaatpuhverdatud soolalahuse retseptid:
Reaktiiv |
Summa lisada (1 ×) |
Lõppkontsentratsioon (1 ×) |
Lisanduv summa (10 ×) |
Lõplik kontsentratsioon (10 ×) |
| NaCl | 8 g |
137 mM | 80 g |
1,37 M |
| KCl | 0,2 g |
2,7 mM | 2 g |
27 mM |
| Na2HPO4 | 1,44 g |
10 mM | 14,4 g |
100 mM |
| KH2PO4 | 0,24 g |
1,8 mM | 2,4 g |
18 mM |
Valikuline: | ||||
| CaCl2 • 2H2O | 0,133 g |
1 mM | 1,33 g |
10 mM |
MgCl2 • 6H2O |
0,10 g | 0,5 mM |
1,0 g | 5 mM |
- Lahustage reagendi soolad 800 ml destilleeritud vees.
- Reguleerige pH soolhappe abil soovitud tasemeni. Tavaliselt on see 7,4 või 7,2. Kasutage pH mõõtmiseks pH-meetrit, mitte pH-paberit või muud ebatäpset tehnikat.
- Lisage destilleeritud vett, et saada lõplik maht 1 liiter.
PBS-lahuse steriliseerimine ja säilitamine
Steriliseerimine pole mõne rakenduse jaoks vajalik, kuid kui steriliseerite seda, jagage lahus alikvootideks ja autoklaavige 20 minutit rõhul 15 psi (1,05 kg / cm).2) või kasutage filtri steriliseerimist.
Võib olla fosfaatpuhverdatud soolalahus säilitatakse toatemperatuuril. See võib olla ka jahutatud, kuid 5X ja 10X lahused võivad jahutamisel sadestuda. Kui peate kontsentreeritud lahuse jahutama, hoidke seda kõigepealt toatemperatuuril, kuni olete kindel, et soolad on täielikult lahustunud. Kui tekib sademeid, viib temperatuuri soojenemine need uuesti lahusesse. Jahutatud lahuse kõlblikkusaeg on 1 kuu.
10-kordse lahuse lahjendamine 1X PBS-i saamiseks
10X on kontsentreeritud või põhilahus, mida võib lahjendada, et saada 1X või tavaline lahus. Normaalse lahjenduse saamiseks tuleb 5X lahust lahjendada viis korda, 10x lahust aga 10 korda.
1-liitrise 1x PBS-i töölahuse valmistamiseks 10-kordses PBS-lahuses lisage 900 ml vette 100 ml 10X lahust. See muudab ainult lahuse kontsentratsiooni, mitte reaktiivide grammi või molaarset kogust. PH ei tohiks muutuda.
PBS versus DPBS
Teine populaarne puhverlahus on Dulbecco fosfaatpuhverdatud soolalahus või DPBS. DPBS-i, nagu PBS-i, kasutatakse bioloogilisteks uuringuteks ja puhvreid pH vahemikus 7,2 kuni 7,6. Seda saab hoida toatemperatuuril. Dulbecco lahus sisaldab madalamat kontsentratsiooni fosfaati. See on 8,1 mM mM fosfaatioone, tavaline PBS aga 10 mM fosfaati. 1x DPBS retsept on järgmine:
| Reaktiiv | Lisanduv summa (1x) |
| NaCl | 8,007 g |
| KCl | 0.201 g |
| Ei2HPO4 | 1,150 g |
| KH2PO4 | 0,200 g |
| Valikuline: | |
| CaCl2• 2H2O | 0,133 g |
| MgCl2• 6H2O | 0,102 g |
Lahustage soolad 800 ml vees. Reguleerige pH soolhappe abil väärtuseni 7,2-76. Reguleerige lõplik maht veega 1000 ml-ni. Autoklaav 20 minutit temperatuuril 121 ° C.
Allikad
- Dulbecco, R.; et al. (1954). "Naastude moodustumine ja puhaste joonte eraldamine poliomüeliidi viirustega". J. Exp. Med. 99 (2): 167–182.
- "Fosfaatpuhverdatud soolalahus (PBS.) Cold Spring Harbor Protocols (2006). Cold Spring Harbori labori ajakirjandus.